猪主要RNA病毒病多重二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

• 作者: 吴润 徐丽华 李军星 王一成 王朝文 袁秀芳 路斌
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: CSFV PRRSV JEV 多重二温式PCR
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 38-43
• 分类号: S852.65
• 字数: 5760字
• 语种: 中文

摘要

通过对Genbank登录的CSFV、PRRSV和JEV的核苷酸序列进行比对分析,找出CSFV的E2基因,PRRSV的Nsp2基因和JEV的E基因为相对保守区域[1].利用生物学软件在保守序列分别设计一对引物,通过对PCR反应条件的优化,确定了最佳引物浓度、最佳Mg2+浓度和最佳退火温度,建立了多重二温式PCR方法检测CSFV、PRRSV和JEV.其扩增的目的片断大小分别为CSFV(482 bp)、PRRSV(576 bp)和JEV(375 bp),将传统三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步,从而大大节省临床检测时间,同时又能通过一个反应体系对CSFV、PRRSV及JEV三种猪主要RNA病毒病进行检测.用50份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为93%以上.表明建立的多重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴润		108	576	13.0	19.0
2	王一成	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	61	386	11.0	16.0
3	袁秀芳	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	65	353	11.0	15.0
4	王朝文		4	65	3.0	4.0
5	徐丽华	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	57	355	11.0	16.0
6	李军星	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	35	167	8.0	11.0
7	路斌		2	9	2.0	2.0