两种重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白转染大鼠成骨细胞效率的体外研究

• 作者: 刘强强 杨昌永 毛棉 王莉 蒋星
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 重组腺相关病毒 增强型绿色荧光蛋白 成骨细胞 转染
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 203-207
• 页数: 5页
• 分类号: R373
• 字数: 4354字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2010.02.004

摘要

目的 比较2种不同重组腺相关病毒(rAAV)介导的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)对大鼠成骨细胞的转染效率,评价其作为成骨细胞病变基因治疗载体的可行性.方法 采用Ⅰ型胶原酶阶段消化法分离培养大鼠成骨细胞并鉴定,rAAV-EGFP按转染复数(MOI) 1×10~3、1×10~4、1×10~5、5×10~5分为只加rAAV和rAAV与腺病毒(ADV)共同转染组转染成骨细胞,倒置荧光显微镜观察转染后荧光强度随转染时间的变化,流式细胞仪检测rAAV2/6-EGFP和rAAV2/9-EGFP对成骨细胞的转染效率及荧光强度,确定转染的较佳MOI值,以此值用MTT法描绘细胞生长曲线,观察rAAV对细胞的毒性.结果 分离培养的细胞具有体内成骨细胞的生物学行为,rAAV对成骨细胞的转染效率随MOI值的增加而提高,ADV(-)组荧光强度在第5 d达到高峰,当MOI为1×10~5时,rAAV2/6-EGFP和rAAV2/9-EGFP的转染效率分别为90.2%、66.1%,MOI值增到5×10~5时转染效率无显著提高;ADV(+)组荧光强度在第3 d即达高峰,MOI值为5×10~5时,rAAV2/6-EGFP和rAAV2/9-EGFP的转染效率为47.6%、30.5%.细胞生长正常,rAAV对细胞活性影响小.结论 两种病毒载体对成骨细胞转染效率均较高,其中rAAV2/6高于rAAV2/9,是一种理想的基因治疗载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王莉		10	71	3.0	8.0
2	蒋星	四川大学华西药学院药理学教研室	6	45	3.0	6.0
6	杨昌永	四川大学华西药学院药理学教研室	7	51	4.0	7.0
7	毛棉	四川大学华西药学院药理学教研室	5	5	2.0	2.0
8	刘强强		1	2	1.0	1.0