腺相关病毒-1介导增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠角膜基质细胞体内外转染的研究

• 作者: 周明乾 周瑾 宫玉波 汤明芳 温茜 罗薇 袁伟 陆晓和
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺相关病毒 绿色荧光蛋白质类 角膜基质细胞 基因转染
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1551-1554
• 页数: 4页
• 分类号: R77
• 字数: 5084字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5123.2007.06.015

摘要

目的:探讨血清1型腺相关病毒(rAAV1)介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因体内、外转染大鼠角膜基质细胞后绿色荧光蛋白(GFP)的表达及转染率.方法:采用携带绿色荧光蛋白报告基因的血清1型腺相关病毒(rAAV1-EGFP)感染原代培养的SD大鼠角膜基质细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察和检测EGFP的表达及阳性率.建立大鼠异体角膜移植模型,用含rAAV1-EGFP转染液的培养基在37℃孵育SD大鼠角膜植片同时浸泡缝线18h,再用此缝线间断缝合,将植片移植到大鼠角膜植床,术后通过荧光体视镜观察Wistar大鼠角膜出现EGFP荧光的起始时间及分布情况.结果:按rAV1-EGFP不同转染倍数(MOI)转染角膜基质细胞.转染后3d,在倒置荧光显微镜下观察到角膜基质细胞的细胞质有GFP阳性表达.体视荧光显微镜观察到大鼠角膜中开始有GFP阳性表达;随MOI值的增高而增强,转染后7～9 d达到高峰,此时检测rAAV1-EGFP对角膜基质细胞的转染效率,MOI=103时是16.3%,MOI=104时是30.3%,MOI=105时是43.6%,MOI=106时是47.5%.rAAV1-EGFP在大鼠角膜中的表达也明显增强.结论:rAAV1-EGFP可以在体内外稳定、有效转染大鼠角膜基质细胞,是角膜基质细胞理想的报告基因.