A1区替换提高人BDD-FVⅢ重链的分泌并缓解其与轻链共转基因细胞链分泌的不均衡性

• 作者: 刘泽隆 屈慧鸽 朱甫祥 缪静 迟晓艳
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 凝血VⅢ因子 变构体重链 分泌 蛋白内含子 蛋白质剪接
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 873-878
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

双载体转凝血Ⅷ因子基因(FVⅢ)有效克服腺相关病毒(AAV)载体容量限制,但FVⅢ重链分泌的低效性导致重、轻链分泌的不均衡.重链分泌的低效性源自其Al区存在与内质网蛋白质分子伴侣结合的位点.本文在我们最近运用蛋白质剪接的双载体共转B区缺失型FVⅢ(BDD-FVⅢ)重链和轻链基因研究的基础上,将重链的A1区替换为猪FVⅢ的A1区,用融合蛋白内含子的重链和轻链转基因实验,定量分析了重链的分泌及其对共转重链和轻链基因细胞分泌剪接BDD-FVⅢ蛋白和活性的影响.结果显示,变构体重链单独转基因时其分泌得到明显改善,达到89±12 ng/ml,明显高于人BDD-FVⅢ重链的分泌(25±9 ng/m1);该变构体重链与轻链共转基因细胞分泌的剪接变构体BDD-FVⅢ和活性分别为219±51 ng/ml和1.47±0.22 U/ml,明显高于剪接的人BDD-FVⅢ的分泌量和活性(116±32 ng/ml和0.8±0.11 U/m1).单独变构体重链和轻链转基因细胞合并培养后,其培养上清中检测到剪接的变构体BDD-FVⅢ和活性,分别为38±7 ng/ml和0.22±0.05 U/ml,提示为不依赖细胞机制的蛋白质剪接所产生.结果表明,A1区替换后重链分泌的增强,可促进基于蛋白质剪接技术的双载体共转重链和轻链基因细胞分泌的剪接BDD-FVⅢ水平和活性,并可缓解链分泌的不均衡性,为动物体内应用双AAV载体共转BDD-FVⅢ重链和轻链基因研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	屈慧鸽		72	330	10.0	15.0
2	刘泽隆		49	99	7.0	9.0
3	缪静		57	250	10.0	14.0
4	朱甫祥		38	21	3.0	4.0
5	迟晓艳		47	54	4.0	6.0