布鲁氏菌和幽门螺杆菌等6种病原菌16S rRNA和cagA等基因的克隆与鉴定

• 作者: 岳秉飞 贺争鸣 高正琴
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 布鲁氏菌 支原体 泰泽氏菌 空肠弯曲菌 肝螺杆菌 幽门螺杆菌,克隆 鉴定
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 715-719
• 分类号: R378
• 字数: 4748字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.08.001

摘要

目的 克隆并鉴定布鲁氏菌的16S rRNA、支原体的16S rRNA、泰泽氏菌的16S rRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因,为建立实时荧光定量PCR检测方法作准备.方法 设计、合成布鲁氏菌的16S rRNA、支原体的16S rRNA、泰泽氏菌的16S rRNA、空肠弯曲菌flaA、肝螺杆菌flaB和幽门螺杆菌的cagA基因的特异性引物;PCR扩增、克隆16S rRNA、flaA、flaB和cagA基因;对重组质粒进行酶切鉴定、PCR鉴定和测序分析.结果 布鲁氏菌的16S rRNA、支原体的16S rRNA、泰泽氏菌的16S rRNA、空肠弯曲杆菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因PCR扩增产物分别在612 bp、600 bp、922 bp、637 bp、1 545 bp和1 168 bp处出现特异性目的 条带,结果均与预期扩增的目的 片段大小一致.将PCR产物分别与pMD18-T载体连接并转化感受态细菌大肠埃希菌JM109.对重组质粒pT-BC16S rRNA、pT-MP16S rRNA、pT-CP16S rRNA、pT-CJflaA、pT-HHflaB和pT-HPcagA分别进行酶切鉴定及PCR鉴定,结果均可见特异性目的 条带.测序结果显示,布鲁氏菌的16S rRNA、支原体的16S rRNA、泰泽氏菌的16S rRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因序列与GenBank中细菌相应序列同源性高达100 %,说明上述6种致病菌的16S rRNA、flaA、flaB和cagA基因已成功克隆.结论 成功克隆了布鲁氏菌16S rRNA、支原体的16S rRNA、泰泽氏菌的16S rRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因,为建立实时荧光定量PCR检测方法奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贺争鸣		122	809	15.0	21.0
2	岳秉飞		74	500	13.0	17.0
3	高正琴		22	124	6.0	10.0