HCV HLA-A2限制性复合多表位基因的构建、克隆表达及其免疫特性分析

• 作者: 刘昕阳 张利军 张惠中 李斌 林芳 沈建军 王希 董轲 韦三华
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒(HCV) CTL 表位 表达
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 201-204,209
• 页数: 5页
• 分类号: R373.21
• 字数: 4582字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性复合多表位基因的原核表达载体,表达纯化,并观察其免疫原性.方法:分别合成HCV HLA-A2限制性多表位基因、人泛素基因,串联后得到融合基因Ub-Mep,克隆入原核表达质粒pRSET-A,转化E.coli BL21,IPTG诱导融合蛋白表达,薄层扫描分析表达蛋白组成;可溶性分析后用Ni~(2+)-NTA凝胶亲和层析柱纯化、透析并浓缩融合蛋白;Western blot分析纯化蛋白的特异性和抗原性;免疫小鼠分析其免疫原性.结果:成功构建复合多表位抗原基因的原核表达质粒pRSET-Ub-Mep,目的基因可高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,Ni~(2+)-NTA 纯化可获得目的蛋白,纯化蛋白具有良好的抗原性和免疫原性.结论:成功构建HCV HLA-A2限制性复合多表位基因并进行原核表达,表达的多表位基因抗原具良好的免疫原性,为进一步的HCV A2限制性复合多表位诱导的细胞免疫应答研究奠定基础.