鸭疫里默氏菌甲羟戊酸激酶基因的重组表达与免疫保护效果研究

• 作者: 余劲术 吕敏娜 吴彩艳 孙铭飞 蔡建平 袁建峰 覃宗华
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭疫里默氏菌 甲羟戊酸激酶 表达 免疫保护
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 1006-1011
• 分类号: S852.61
• 字数: 4982字
• 语种: 中文

摘要

在从鸭疫里默氏菌(RA)基因组文库筛选毒力基因的过程中,作者获得了编码RA甲羟戊酸激酶的基因(RAMVA),将该基因片段提交GenBank,收录号为GQ398751.测序分析结果显示其开放阅读框长492 bp,共编码163个氨基酸.根据序列信息设计引物,用PCR方法从RA中扩增出RAMVA的编码区并与表达质粒pMAL-C2X连接,构建重组质粒pMAL-RAMVA.经限制性酶切和序列测序鉴定序列正确无误后将pMAL-RAMVA转化至E.coli BL21(DE3)构建重组表达菌E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA.用IPTG诱导重组菌成功诱导RAMVA的表达,通过SDS-PAGE分析表达产物,表达量占全菌总蛋白的15.6%,且重组表达的甲羟戊酸激酶在大肠杆菌中表达时以可溶性状态存在.雏鸭免疫试验表明,接种重组表达菌E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA 2周后,可产生对RA致死量攻击达42.3%的免疫保护率.