鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因原核表达及其功能鉴定

• 作者: 于圣青 何晶 刘玲俐 单敏 李涛 涂剑 王小兰 罗廷荣 陈烨 黄雪龙
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 鸭疫里默氏杆菌 Tet(X)基因 原核表达 功能鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 844-850
• 页数: 7页
• 分类号: S858.32
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.04.23

摘要

[目的]确定鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因是否与四环素类耐药相关,寻找出抗鸭疫里默氏杆菌药物研发新靶点.[方法]克隆鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因,以大肠杆菌原核表达体系进行诱导表达,利用生物信息学软件分析原核表达蛋白的功能和特性,并采用实时荧光定量PCR检测四环素和多西环素对鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因的调控作用.[结果]从鸭疫里默氏杆菌基因组扩增获得的Tet(X)基因编码框全长1167 bp,编码388个氨基酸,其编码蛋白分子量约42.53 kD,理论等电点(pI)为10.073,与AS87_09615(Yb2)、RIA_0369(YA-GD)、RAYM_08235(RA-YM)、G148_1777(RA-CH-2)、RIA_0365(YA-GD)、G148-1767(RA-CH-2)、B739_0035(RA-CH-1)和B739_0030(RA-CH-1)等8个来源于不同种鸭疫里默氏杆菌的蛋白具有较高同源性(96％～100％).利用原核表达体系诱导表达获得的Tet(X)融合蛋白分子量约45.40 kD,且主要以包涵体的形式表达.Tet(X)融合蛋白能有效提高宿主菌株对典型四环素类药物(四环素和多西环素)的最小抑菌浓度(MIC);实时荧光定量PCR检测结果显示,四环素和多西环素对鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因表达量的调控呈非线性.四环素浓度为0～4 mg/L时,Tet(X)基因相对表达量随药物浓度的增加而逐渐增加;浓度为4～12 mg/L时,Tet(X)基因相对表达量随药物浓度的增加而逐渐降低.多西环素药物浓度为0～3 mg/L时,Tet(X)基因相对表达量随药物浓度的增加而逐渐增加;浓度为3～6 mg/L时,Tet(X)基因相对表达量随药物浓度的增加而逐渐降低.[结论]Tet(X)可有效提高宿主菌株对四环素类药物的耐受性,在一定的四环素类药物剂量范围内可诱导Tet(X)基因表达.不同鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因具有不同来源,说明Tet(X)可能存在基因水平转移,且具有环境扩散的风险.