利用果蝇细胞研究基因表达转录后调控的双报告基因系统的建立

• 作者: 刘勇 张婷 肖强海 韦有恒 马维骏
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 转录后调控元件 双报告基因 荧光素酶 果蝇S2*细胞
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 22-24,27
• 分类号: Q786
• 字数: 3021字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2010.04.009

摘要

目的 构建能够在果蝇S2*细胞中检测转录后调控元件对基因表达调控影响的双报告基因系统.方法 首先利用pAc5.1/V5-His c,pGL3-basic和pRL-SV40载体,构建能在果蝇体系中表达萤火虫荧光素酶的报告基因质粒pAc-Fluc,以及用作内参照表达海洋腔肠荧光素酶的质粒pAc-Rluc.将TNF-α基因mRNA的3'UTR连接至pAc-Fluc的Luc编码区下游构建pAc-Fluc-TNF-α质粒,并与pAc-Rluc共转至果蝇S2*细胞,检测两种荧光素酶的相对活性.结果 成功构建了能够在果蝇S2*细胞中组成型表达的双报告基因系统;在TNF-α mRNA 3'UTR控制下表达的荧光素酶活性比对照有显著下降.结论 可以利用该双报告基因系统在果蝇细胞中研究转录后调控元件对基因的表达调控.