新西兰白兔γ-干扰素在昆虫细胞中的表达及其活性测定

• 作者: 任雪枫 何孔旺 张则斌 徐为中 王芳 胡波 范志宇
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 家兔 γ-干扰素 克隆 重组杆状病毒
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 9-13
• 分类号: Q786
• 字数: 4450字
• 语种: 中文

摘要

用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰素基因转入转移载体pFastBacTM1,得到重组转移载体pFastBacTM1-IFN-γ,用pFastBacTM1-IFN-γ转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌 DH10Bac 感受态细胞,经筛选得到重组穿梭载体Bacmid-IFN-γ,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-IFN-γ,经RT-PCR鉴定,结果显示重组IFN-γ在Sf9昆虫细胞中得到表达.用兔IFN-γ ELISA试剂盒测得重组兔IFN-γ的浓度为1 950 pg/mL.细胞病变抑制法结果显示,重组兔IFN-γ在MDCK上显示了较高的抗病毒活性,并测得重组兔IFN-γ的活性约为5.12×105 U/mg.