H9亚型鸭源禽流感病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR快速检测方法的建立

• 作者: 万春和 傅光华 施少华 林建生 林甦 林秋敏 林芳 程龙飞 陈红梅 黄瑜
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: H9亚型禽流感病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR(RRT-PCR)
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 387-391
• 分类号: S855.3
• 字数: 3460字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0384.2010.04.001

摘要

针对H9亚型禽流感HA基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR,RRT-PCR),最低检测限为8.33×102拷贝质粒DNA,与常规PCR相比,灵敏度高出100倍.扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为(83.83±0.22)℃,组内变异系数为0.52%～1.48%,组间变异系数为0.71%～2.21%,可重复性好;对H5亚型禽流感病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭源禽1型副粘病毒无扩增;检测速度快,从样本处理到报告结果仅需4.5 h.