刚地弓形虫RH株速殖子协同VP-16体外杀伤小鼠结肠癌细胞ct26的作用

• 作者: 叶彬 孔璟 武卫华 高剑
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 小鼠结肠癌ct26细胞 依托泊甙 细胞周期
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 720-724
• 分类号: R382.5
• 字数: 4511字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.08.002

摘要

目的 探讨刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌ct26细胞周期的影响及其协同细胞周期特异性抗癌药依托泊甙(VP-16)对ct26细胞的杀伤作用.方法 建立弓形虫RH株速殖子与小鼠结肠癌ct26细胞不同比例的共培养模型(虫/细胞比例分别为2∶1、4∶1、8∶1、16∶1),流式细胞仪检测24h细胞周期改变;以虫细胞比例2∶1预先感染ct26细胞24h,CCK-8比色法观察不同浓度VP-16对细胞增殖抑制的改变;荧光显微镜观察VP-16 (40μg/mL)对感染虫体细胞的形态学改变.台盼蓝染色观察不同浓度VP-16分别作用弓形虫RH株速殖子悬液(1×106/mL)2h、4 h、12 h、24h的虫体存活度改变.琼脂糖凝胶电泳观察VP-16 (20μg/mL)对虫体DNA影响.结果 流式细胞仪检测发现各浓度弓形虫速殖子均可明显改变ct26细胞24h周期分布,使G0/G1期细胞百分比下降,G2/M期百分比显著升高(P<0.01).2×106个速殖子感染细胞24h可使S期和G2期细胞百分比共同增长14.92%.CCK-8比色法检测结果显示虫细胞比例2∶1预先感染ct26细胞24h可有效增强各浓度VP-16对ct26细胞的杀伤作用;Hochest 33258染色结合荧光显微镜观察到虫体胞质寄生形态及VP-16诱导感染细胞凋亡典型形态;10μg/mL及更高浓度 VP-16作用弓形虫4h以上均可使虫体全部死亡;琼脂糖凝胶电泳发现VP-16 (20μg/mL)可使弓形虫速殖子DNA呈现典型的云梯状条带.结论 弓形虫RH株速殖子可使小鼠结肠癌ct26细胞发生G2/M期,可有效增强细胞周期特异性抗癌药VP-16的抗癌作用,且弓形虫增殖亦明显受抑并发生凋亡.