乙型肝炎病毒B和C基因型全基因组的克隆与真核细胞表达

• 作者: 张锦前 成军 李晓光 洪源 王琦
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒 乙型 重组 遗传 DNA复制 基因表达 真核细胞
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 10-13
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3080字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2010.01.003

摘要

目的 构建B和C基因型重组HBV表达载体,检测其在Huh7细胞内的DNA复制和HBsAg、HBeAg的表达.方法 扩增B和C基因型HBV全基因组,并将其连接于真核表达载体pHY106,将这2个载体分别转染Huh7细胞,以pHY106空载体转染作对照.Southern印迹法检测转染72 h后HBV DNA的复制,实时定量PCR检测转染后24、48、72、96和120 h Huh7细胞内HBV DNA水平,ELISA检测转染后24、48、72、96和120 h细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg的表达.结果 成功构建了B和C基因型HBV表达载体.转染Huh7细胞后72 h,Southern印迹法检测到细胞内HBV核心颗粒内的HBV复制中间体,包括松弛环状DNA、双链DNA和单链DNA.实时定量PCR检测发现病毒DNA复制水平可达8 lg拷贝/mL、ELISA结果显示HBsAg和HBeAg的表达于转染后72 h达高峰,然后逐渐下降.结论 成功构建B和C基因型重组HBV真核表达载体,并能在Huh7细胞内高水平复制和表达,为进一步研究HBV的结构与功能、基因表达与调控,以及抗HBV药物的筛选等提供了良好的平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晓光	哈尔滨医科大学附属第二临床医院感染病科	35	190	6.0	12.0
2	成军	北京地坛医院传染病研究所	210	843	13.0	20.0
3	洪源	北京地坛医院传染病研究所	44	70	5.0	6.0
4	王琦	北京地坛医院传染病研究所	29	36	3.0	4.0
5	张锦前	北京地坛医院传染病研究所	20	80	5.0	8.0