抗Aβ鼠源单克隆抗体的人源化改造及其表达鉴定

• 作者: 常德 李彦玮 梁平 赵雪梅
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 人源化抗体 嵌合抗体 β-淀粉样蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 862-867
• 分类号: R362
• 字数: 3502字
• 语种: 中文

摘要

目的 将前期构建的抗Aβ人-鼠嵌合抗体进行可变区人源化改造,为抗Aβ抗体在临床人体中应用奠定基础.方法 采用模板替换法对已构建的人-鼠嵌合抗体基因中的重、轻链可变区框架区进行人源化改造,构建抗Aβ人源化抗体的真核表达载体.用脂质体法将重、轻链共转染CHO细胞进行表达,采用ELISA法检测表达产物效价、表达量;同时用SDS-PAGE及Western blot检测表达产物分子质量;免疫组化法鉴定其生物学活性.结果 重组改造后的抗Aβ人源化抗体基因重链约为1 500 bp,轻链约为750 bp,与预期一致.转染CHO细胞后获得表达,表达量为1.11 mg/L,抗体重链相对分子质量约为51 ku,轻链约为25 ku.ELISA结果显示能与Aβ特异性结合(细胞培养上清A值:2.24),与改造前的嵌合抗体比较效价基本相同.抗体人源化检测显示,只能被羊抗人抗体识别,不能被羊抗鼠抗体识别.免疫组化显示表达产物有结合Aβ抗原的活性.结论 将抗Aβ人-鼠嵌合抗体进行可变区人源化改造后,基本保持了原嵌合抗体的生物学特性,为其今后应用于临床提供了可能性.