猪带绦虫乳酸脱氢酶基因的序列分析、克隆表达和免疫学分析

• 作者: 余新柄 廖兴江 徐劲 戴佳琳 杜武英 胡旭初 黄江
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪带绦虫 乳酸脱氢酶A 序列分析 克隆表达 免疫学特性
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 246-251
• 页数: 6页
• 分类号: R383.3
• 字数: 4741字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.03.014

摘要

目的 利用生物信息学方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中识别乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDH-A),分析和预测其编码蛋白的结构和功能,并对其进行克隆表达和免疫学特性研究.方法 利用NCBI和ExPASy中有关基因、蛋白的序列和结构信息分析工具,结合其它生物信息学分析软件包,从猪带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别乳酸脱氢酶A(Ts LDH-A)的基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白的结构与功能;并将Ts LDH-A克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中诱导表达,表达产物经纯化后用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析.结果 该基因全长1 332bp,编码331个氨基酸.其氨基酸序列与其它物种LDH-A氨基酸序列一致性可达54%,具有乳酸脱氢酶保守结构域.其编码的蛋白理论分子量为3 5461.1Da ,有3个跨膜区和多个磷酸化位点,蛋白的理化性质较稳定.预测有4个主要的B细胞抗原表位,L-乳酸脱氢酶活化位点之一的His192 包含于表位190-199aa中.酶催化位点的3个关键氨基酸在空间结构上相互靠近.PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-Ts LDH-A构建成功.SDS-PAGE结果表明目的 基因在大肠杆菌BL-21/DE3中获得表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白.重组蛋白能被Ts LDH-A重组蛋白免疫的SD大鼠血清、感染了猪带绦虫的病人血清及猪血清识别,表明其具有较好的免疫原性和免疫反应性.结论 应用生物信息方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了Ts LDH-A的全长序列并预测得到其编码蛋白的结构与功能方面的信息,该基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐劲	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	104	568	13.0	17.0
2	胡旭初	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	108	574	13.0	17.0
3	黄江	贵阳医学院多媒体形态学实验室	76	329	11.0	14.0
4	廖兴江	贵阳医学院多媒体形态学实验室	46	215	8.0	12.0
5	戴佳琳	贵阳医学院多媒体形态学实验室	38	96	5.0	7.0
6	杜武英	贵阳医学院多媒体形态学实验室	5	24	3.0	4.0
7	余新柄	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	1	11	1.0	1.0