克隆、表达及纯化核糖体蛋白S6用于体外激酶活性检测

• 作者: 刘安玲 李明 贾春宏 赵莉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 核糖体蛋白S6 S6激酶 原核表达 体外激酶活性测定
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 359-362
• 分类号: Q78
• 字数: 3335字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.03.015

摘要

目的:构建40S核糖体蛋白S6的原核表达载体,表达并纯化S6蛋白,将其作为底物用于S6激酶(S6K)的体外活性测定.方法:采用RT-PCR方法从人胚肾细胞HEK293中获取S6 cDNA,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体中,进行酶切及测序鉴定;IPTG诱导GST-S6融合蛋白在大肠杆菌中表达,用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-S6,免疫沉淀法检测该蛋白是否可作为底物用于S6K的体外激酶活性测定.结果:酶切及测序鉴定表明构建了S6原核表达载体,并表达及纯化出GST-S6融合蛋白,相对分子质量为55×103.该蛋白可用于S6K的体外激酶活性测定,特异性强.结论:S6蛋白的克隆、表达与纯化成功,可用于S6K的体外激酶活性测定,为研究S6K的功能奠定了基础.