泛素--核糖体蛋白S27a基因的克隆、测序及其原核GST融合表达和纯化

• 作者: 曾雪英 黄功华
• 来源期刊: 赣南医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 泛素--核糖体蛋白S27a 基因的克隆 基因测序 GST融合表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 589-592
• 页数: 4页
• 分类号: Q52|Q72
• 字数: 3669字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5779.2005.05.006

摘要

目的:克隆泛素-核糖体蛋白S27a基因并在大肠杆菌细胞内高效表达,并纯化该蛋白.方法:从HL-60细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得泛素/核糖体蛋白S27a的编码区cDNA,将Hind Ⅲ/NdeⅠ双酶切的PCR产物连接到同样双酶切的GST融合表达载体pGEXGST构建为融合表达质粒pGEXGST-S27a,转化感受态的大肠杆菌JM109实现质粒的扩增与纯化,经DNA测序确证后再转化感受态表达菌BL21,表达并纯化出融合蛋白.结果: (1) PCR 扩增获得长约560bp 的泛素-核糖体蛋白S27a 基因片段.(2) SDS - PAGE 证明, 泛素-核糖体蛋白S27a-GST融合蛋白的分子量为43kDa.(3)通过过柱法纯化出泛素-核糖体蛋白S27a-GST融合蛋白.结论:成功克隆出泛素-核糖体蛋白S27a的基因,并在表达菌BL21中可见GST融合表达,并纯化出该融合蛋白,为进一步研究其功能获得了候选蛋白分子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾雪英	赣南医学院显微实验室	9	72	4.0	8.0
2	黄功华	中山大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0