山羊Sox2基因克隆、原核表达和GST融合蛋白纯化

• 作者: 刘平 卢克焕 卢晟盛 杨照海 毕方方 赵华 郑喜邦
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: Sox2基因 原核表达 蛋白纯化 山羊
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1454-1459
• 页数: 6页
• 分类号: S827|Q78
• 字数: 4037字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在克隆山羊Sox2基因,构建pGEX-Sox2原核表达重组质粒,从大肠杆菌中获得纯化的GST-Sox2融合蛋白.应用RT-PCR方法从6周龄胎山羊生殖嵴扩增Sox2基因编码全序列,将其克隆到pMD18-T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体.重组质粒pGEX-Sox2转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳及Western blotting检测GST-Sox2融合蛋白表达,用谷胱甘肽Sepharose 4B介质分离纯化该融合蛋白.结果表明,山羊Sox2基因编码序列全长为960 bp;在优化的表达条件(1 mmo|·L-1 IPTG,22℃诱导16h)下,重组质粒(pGEX-Sox2)在大肠杆菌得到了高效表达;谷胱甘肽Sepharose 4B颗粒纯化蛋白得到预期大小的融合蛋白(约60 ku).结论,本研究克隆了山羊Sox2基因,获得了纯化的GST-Sox2融合蛋白,为制备其多克隆抗体奠定了基础,为进一步研究山羊iPS细胞(Induced pluripotent stem cells)创造了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨照海	广西大学动物科学与技术学院	4	29	3.0	4.0
2	卢克焕	广西大学动物科学与技术学院	92	660	15.0	20.0
3	郑喜邦	广西大学动物科学与技术学院	22	91	6.0	8.0
4	卢晟盛	广西大学动物科学与技术学院	73	415	12.0	16.0
5	刘平	广西大学动物科学与技术学院	17	96	6.0	9.0
6	毕方方	广西大学动物科学与技术学院	12	28	2.0	5.0
7	赵华	广西大学动物科学与技术学院	4	21	2.0	4.0