山羊SOX2多克隆抗体制备

• 作者: 刘平 卢克焕 卢晟盛 宗自杰 岑小妹 岳磊磊 张昀 张明 李恭贺 郑喜邦
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: Sox2 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 山羊
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 178-183
• 分类号: S827|S852.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.01.021

摘要

[目的]构建山羊Sox2原核表达载体—pRSET-Sox2,并将诱导表达、纯化的His-Sox2融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备Sox2多克隆抗体.[方法]从pMD18T-Sox2载体上以BamHI和XhoI双酶切截取Sox2 片段,然后将其亚克隆到pRSET-A表达载体上,获得pRSET-Sox2重组质粒.转化了pRSET-Sox2的大肠杆菌BL21(DE3),1 mmol·L-1IPTG 37℃诱导4h,SDS-PAGE电泳及Western blotting检测融合蛋白表达.相同条件下大量增菌诱导,用Ni- NTA argrose介质分离纯化His-Sox2重组蛋白.将体外复性的融合蛋白皮下注射新西兰大白兔,间隔2-3周注射一次,共4次.最后一次注射后7d,采血分离血清,用Western blotting检测抗体特异性.[结果](1)原核表达载体pRSET-Sox2在大肠杆菌BL21 (DE3)得到了高效表达；(2)纯化的His-Sox2融合蛋白能够满足多克隆抗体制备的要求；(3)经Western blotting检测,Sox2多克隆抗体能与His-Sox2融合蛋白特异性结合.[结论]制备了高特异性山羊Sox2多克隆抗体,为深入探讨山羊Sox2基因的生物学功能奠定了基础,也为山羊(iPS)细胞检测创造了良好条件.