慢病毒介导siRNA干扰MyD88表达对大鼠肺泡巨噬细胞功能的影响

• 作者: 刘中民 唐光亮 范慧敏
• 来源期刊: 同济大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: MyD88 大鼠肺泡巨噬细胞 RNAi 慢病毒 IL-1β IL-6
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 9-14
• 分类号: R392.4
• 字数: 4253字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0392.2010.03.003

摘要

目的 采用RNA干扰技术,通过构建表达大鼠髓样分化因子88(MyD88)siRNA的慢病毒干扰大鼠肺泡巨噬细胞MyD88的表达,检测其对细胞功能的影响.方法 针对MyD88基因,设计并构建3对siRNA表达质粒,分别与预先构建好表达MyD88的质粒共转染HEK-293T细胞,Westem b1ot检测MyD88的表达情况,筛选出其中1对干扰效率最高的siRNA,用Gateway的方法构建慢病毒干扰载体包装成慢病毒,将慢病毒转染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383细胞并加入内毒素(LPS)诱导,未转染慢病毒的细胞作为空白对照组和LPS激活组:空白对照组加入与LPS等体积的PBS;LPS激活组加入LPS刺激.ELISA测定各组细胞因子(IL-1β、IL-6)释放情况.结果 成功筛选出了1对干扰效率最高的siRNA并包装成慢病毒,病毒滴度为2.0×106TU/ml.LPS诱导后,与对照组相比,感染慢病毒的NR8383细胞MyD88表达明显受到抑制,IL-1β、IL-6的释放均显著减少,差异有统计学意义.结论 慢病毒介导RNA干扰能够有效抑制NR8383细胞MyD88基因的表达,显著减少胞因子的释放,为以抗原提呈细胞(APC)为靶向的体内实验治疗大鼠肺移植相关闭塞性细支气管炎(obljterative bronchitis,OB)的研究提供了手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范慧敏	同济大学附属东方医院心胸外科	139	378	8.0	12.0
2	刘中民	同济大学附属东方医院心胸外科	156	455	9.0	13.0
3	唐光亮	同济大学附属东方医院心胸外科	2	9	2.0	2.0