慢病毒介导的稳定沉默MyD88基因的胰腺导管细胞株的建立

• 作者: 刘勇 周总光 周斌 李园 李扬 詹兰 陈珂玲
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 髓样分化因子88(MyD88) 慢病毒 RNA干扰 急性胰腺炎 ARIP
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 293-297
• 分类号: R576
• 语种: 中文

摘要

目的 建立稳定沉默髓样分化因子88基因(MyD88)的大鼠胰腺导管细胞株ARIP.方法 设计并构建编码MyD88 mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并用三质粒包装系统包装成慢病毒,分别命名为Lenti-shMyD88-1和Lenti-shMyD88-2.将ARIP分为未处理组、Lenti-Non Target阴性对照组、Lenti-shMyD88-1组和Lenti-shMyD88-2组.并用相应的病毒转导(未处理组只换液).经流式分选和抗生素筛选结合的方法筛选绿色荧光蛋白阳性细胞,测定细胞的转导效率并用real-time PCR方法测定沉默效率.结果 成功构建了编码表达MyD88的shRNA表达质粒.经流式分选和抗生素筛选后,慢病毒转导效率均达到100%.与未处理组相比,Lenti-shMyD88-1和Lenti-shMyD88-2对MyD88 mRNA的沉默效率分别为82.73%±1.203%和75.56%±1.176%.结论 建立了MyD88基因稳定沉默的胰腺导管细胞株.为探讨MyD88基因与急性胰腺炎的相关性提供了一个全新的、稳定的、可操作的细胞模型.