猪肺炎支原体P36蛋白间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 冯志新 刘茂军 吴叙苏 祝永琴 邵国青
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪肺炎支原体 P36蛋白 IgG 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 987-992
• 分类号: S858.282.4+3
• 字数: 4202字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2010.05.016

摘要

将已构建的含有猪肺炎支原体P36基因的酵母表达质粒pPICZα-A-P36在酵母菌X-33里进行表达,并对表达的蛋白进行Western-blotting鉴定.将其作为包被抗原包被酶标板,用羊抗猪IgG-HRP作为酶标二抗,并分别对抗原浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度以及作用时间等进行了优化,最终建立了稳定的抗猪肺炎支原体IgG的间接ELISA检测方法.应用该方法检测猪鼻支原体、猪絮状支原体、猪圆环病毒阳性血清等都是阴性,说明该方法具有良好的特异性.批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数均小于8%,说明该方法具有良好的重复性.利用该方法检测猪肺炎支原体活疫苗(168株)免疫猪血清中IgG的动态变化,结果表明,免疫猪血清中的IgG在免疫后分泌逐渐增加,直至免疫后8周,而经强毒攻毒后抗体滴度明显增高.