金黄色葡萄球菌糖肽水解酶LytM及其C端的表达、纯化与功能研究

• 作者: 刘玉 吴娜 杨光 牟春花 董洁 邵宁生 高亚萍
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄球菌,金黄色 LytM 溶菌作用 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 543-546
• 分类号: R378.1
• 字数: 3197字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.06.012

摘要

目的 利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌(SAU)糖肽水解酶LytM及其C端185～316 aa蛋白(LytM185～316),检测其生物学活性,并制备多克隆抗体,为检测LytM活性体的天然形式和产生机制以及研究LytM蛋白在SAU感染中的生物学意义奠定基础.方法 以SAU 8325-4基因组为模板,PCR扩增lytM及其C端基因,并将其克隆入pET-28a构建重组表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导阳性克隆表达目的 蛋白,通过亲和纯化获得目的 蛋白LytM及LytM185～316,并制备LytM的多克隆抗体;用薄层层析法测定LytM以及LytM185～316的生物活性,并检测重组蛋白对SAU 8325-4菌体的裂解作用.结果 成功构建了表达载体pET-28a-LytM和pET-28a-LytM185～316,获得了纯度较高的重组蛋白LytM及LytM185～316,经测定LytM不能够水解底物而LytM185～316具有较强的糖肽水解酶活性.制备了高效价的抗LytM的多克隆抗体,并证实其可以与LytM及LytM185～316 特异性结合.结论 只含有C端185～316 aa的重组蛋白能够水解底物,而全长的LytM不具有糖肽水解酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨光	军事医学科学院基础医学研究所	44	152	7.0	9.0
2	邵宁生	军事医学科学院基础医学研究所	79	523	11.0	20.0
3	刘玉	军事医学科学院基础医学研究所	14	26	3.0	4.0
4	高亚萍	军事医学科学院基础医学研究所	26	80	5.0	7.0
5	董洁	军事医学科学院基础医学研究所	18	43	4.0	5.0
6	吴娜	军事医学科学院基础医学研究所	24	80	5.0	7.0
7	牟春花	军事医学科学院基础医学研究所	4	2	1.0	1.0