蔗糖富集环境土壤微生物宏基因组分析及蔗糖水解相关酶基因克隆

• 作者: 庞浩 杜丽琴 胡媛媛 韦宇拓 黄日波
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 宏基因组 环境DNA DNA文库 细菌多样性统计技术 蔗糖水解酶
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 403-407
• 页数: 5页
• 分类号: Q556|Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1145.2010.00403

摘要

蔗糖水解酶是蔗糖转化生成生物质能源的关键酶,且还具有重要的转糖苷功能.针对蔗糖富集的土壤环境,利用未培养的宏基因组技术对蔗糖水解相关的酶基因进行克隆.首先使用微生态分子技术对蔗糖富集的土壤样品进行分析,在可信区间为95%的情况下,样品覆盖率为20%(C指数为0.2),Species richness指数为235.0,Shannon index为5.288 9,说明这个蔗糖富集样品中的微生物来源具有广泛性.然后使用宏基因组技术构建这个土壤样品中微生物的DNA文库,成功构建一个包含约100 000个克隆的大片段DNA Fosmid文库.对文库中的Fosmid质粒进行随机测序,发现质粒的外源DNA与已报道的DNA都没有同源性,文库所克隆的DNA都来源于仍没有被研究的微生物.使用蔗糖作为唯一碳源对文库进行筛选,获得了能水解蔗糖的克隆.在蔗糖水解能力最强的两个克隆中所包含的蔗糖水解酶与GenBank数据库中已知蔗糖酶的相似性分别为38%和68%.图2表2参27