人日光性角化病角质形成细胞的体外培养

• 作者: 何黎 刘流 李坤杰 沈丽达 涂颖 龙庭凤
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 日光性角化病 角质形成细胞 分离 培养 生物学特性 组织构建
• 年，卷（期）: 2010,（20）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 3660-3665
• 分类号: R318
• 字数: 7568字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.20.012

摘要

背景:国内外相关研究已建立和发展了多种疾病状态下角质形成细胞的培养方法,但目前关于人日光性角化病角质形成细胞体外培养的研究未见报道.目的:体外分离培养人目光性角化病角质形成细胞并鉴定其生物学特性.方法:皮肤标本由昆明医学院第一附属医院皮肤科和整形外科提供.两步消化法体外分离培养日光性角化病组和正常老年人面部皮肤对照组的角质形成细胞,无血清培养技术进行人体角质形成细胞的培养,待细胞生长至70%～80%融合时消化传代.在倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜下观察细胞形态及超微结构,应用免疫荧光检测角蛋白在细胞内的表达,划痕实验和双层软琼脂集落形成率实验观察细胞的迁移和成瘤能力.结果与结论:原代培养的细胞显示典型的表皮细胞特征:倒置显微镜下培养的细胞呈典型的"铺路石"状,经免疫荧光检测为角蛋白阳性,电镜下可见细胞内有大量的张力纤维.体外成功分离培养出老年人病变条件下的角质形成细胞.日光性角化病组与对照组相比:细胞的核仁增大,异染色质及线粒体数量增多,内质网数量少特点,细胞较为幼稚.生长曲线、划痕实验和双层软琼脂集落形成率实验表明,日光性角化病患者的角质形成细胞较同龄老年人具有更强的增殖、迁移和成瘤的能力.实验证实体外培养的日光性角化病角质形成细胞仍具有一定的非典型增生细胞的特性.