抗人CD40功能性嵌合抗体的制备及其高效表达

• 作者: 乔春霞 化晓莉 张学光 黎燕
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: CD40 抗体,单克隆 杂交瘤 嵌合抗体 真核表达
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 225-229
• 分类号: R392.11
• 字数: 4972字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.03.007

摘要

目的 构建抗CD40嵌合抗体的真核表达载体,实现在真核细胞中的高效表达.方法 采用RT-PCR法,从分泌鼠源抗人CD40抗体的杂交瘤细胞系5C11中钓取其轻、重链基因,进行序列测定.将5C11轻重链可变区基因分别克隆入表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体(c5C11)的轻链真核表达载体5C11L-pCMV及重链真核表达载体5C11H-pCMV.将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,利用夹心ELISA法测定上清中c5C11的浓度,通过流式细胞术检测c5C11与膜抗原的特异性结合.通过生物信息学相关方法对c5C11的氨基酸序列进行合理改造,尝试在保持生物学功能的基础上提高c5C11的表达量.结果 成功钓取鼠源单抗5C11的轻重链可变区基因并构建了真核表达载体,实现了c5C11的分泌表达;嵌合抗体较好地保留了鼠源母本抗体的抗原识别能力.利用计算机辅助设计,一定程度上提高了c5C11的表达量.结论 为后续研究嵌合抗CD40抗体对B淋巴瘤等肿瘤的治疗提供了一定的依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学光	苏州大学医学生物技术研究所	399	1957	18.0	24.0
2	黎燕	军事医学科学院基础医学研究所	139	930	14.0	25.0
3	化晓莉	苏州大学医学生物技术研究所	1	0	0.0	0.0
7	乔春霞	军事医学科学院基础医学研究所	7	14	2.0	3.0