siRNA沉默PPARα减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡

• 作者: 冉志华 徐锡涛 朱明明 童锦禄 聂芳 萧树东 郑青 陈翔
• 来源期刊: 胃肠病学
• 学科: 医学
• 关键词: RNA,小分子干扰 PPARα 羟喜树碱 结肠肿瘤 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 275-279
• 分类号: R9
• 字数: 3379字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-7125.2010.05.005

摘要

背景:多药耐药一直是遏制提高结肠癌化疗有效性的瓶颈问题.目的:探讨沉默PPARα能否减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡,从而阐明PPARα在羟喜树碱耐药中的潜在作用.方法:构建针对PPARα基因的siRNA干扰载体,并转染人结肠癌SW1116细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞,以RT-PCR和蛋白质印迹法验证干扰效果.经羟喜树碱干预后,以MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡.以定量RT-PCR检测不同浓度miR-506前体转染SW1116细胞后对PPARα下游调控靶基因mRNA表达的影响.结果:siRNA干扰载体Ⅲ的沉默效果最佳,PPARα mRNA和蛋白表达分别下调了约94.1%±3.4%和70.8%±8.6%.稳定转染siRNA的SW1116细胞的半数抑制浓度(IC50)为(332±19)μg/L,亲本SW1116细胞为(152±12)μg/L.在相同浓度羟喜树碱的作用下,亲本SW1116细胞的凋亡率显著高于稳定转染siRNA的SW1116细胞(150μg/L:7.0%±2.5%对2.8%±1.6%;300μg,L:32.4%±7.1%对18.5%±2.7%).miR-506前体下调HMGCS-2表达,上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达,其中上调CCND1的作用最为明显.结论:成功构建了,针对PPARα的siRNA干扰载体;沉默PPARα能增强SW1116细胞对羟喜树碱的抵抗性,可能与下调HMGCS-2表达并上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达有关.