手足口病CA16型VP1亚单位疫苗的构建制备及免疫原性初步分析

• 作者: 李培锋 李晓楠 段越强 王希良 罗德炎 赵忠鹏
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CA16病毒 Bac-to-Bac 表达系统 重组VP1蛋白 免疫原性
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 疫苗学
• 页码范围: 250-255
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4736字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2010.03.016

摘要

目的 制备CA16型VP1蛋白疫苗并进行免疫原性初步分析,为手足口病CA16疫苗的深入研究提供资料.方法 利用RT-PCR技术获得CA16 VP1基因,克隆到载体pFastBac HT A,与Bacmid DNA重组,转染Sf9昆虫细胞,重组CA16 VP1蛋白与Al(OH)_3佐剂混合制备重组CA16 VP1蛋白疫苗,腹腔免疫BALB/c小鼠,2次免疫后进行免疫效果初步评价.结果 用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western blot法,证明重组CA16 VP1蛋白在昆虫细胞Sf9中得到表达,用ELISA和微量中和法检测到免疫小鼠血清有特异IgG和中和抗体产生,最佳免疫抗原剂量为20μg,其特异IgG效价为1:1600,中和抗体效价为1:250;通过淋巴细胞增殖试验和细胞因子测定,证明诱导T细胞应答,诱发Th1/Th2型免疫应答.结论 CA16 VP1基因克隆成功,并在Sf9昆虫细胞中获得表达,构建的蕈组CA16 VP1亚单位疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为今后研制手足口病CA16疫苗奠定了基础.