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大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定
大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定
作者:
徐逸
朱舟
汪琦
王伟
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
CX43
腺病毒载体
RNA干扰
基因治疗
缺血性脑损伤
摘要:
目的:构建缝隙连接蛋白connexin 43(CX43)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行基因治疗研究奠定基础.方法:合成CX43发夹样shRNA的DNA单链一对和对照单链scramble一对,退火后将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因的穿梭质粒pAd shRNA/H1,得到pAd shRNA/H1-CX43和pAd shRNA/H1-scramble.分别酶切及DNA测序鉴定后,经Pme I线性化后转化入BJ5187-AD-1感受态细菌,在细菌内进行同源重组构建含目的基因的重组腺病毒质粒载体.用Pac I酶切鉴定重组菌.将Pac I酶切重组的两种腺病毒质粒载体后,经脂质体转化293细胞进行包装得到重组的腺病毒颗粒,并通过293细胞绿色荧光表达反应重组腺病毒表达情况.将重组的腺病毒Ad-Cx43 shRNA和对照病毒Ad-scramble shRNA分别感染大鼠原代培养的星形胶质细胞, 并检测星形胶质细胞CX43的表达.结果:证实穿梭质粒的以及重组腺病毒质粒均构建正确,腺病毒质粒转染293细胞后48 h即可见绿色荧光蛋白表达,10 d后全部细胞表达绿色荧光,并有半数细胞飘起,收获病毒感染培养星形胶质细胞后48 h,均有绿色荧光表达,经感染Ad-Cx43 shRNA的星形胶质细胞CX43的表达明显低于感染对照病毒Ad-scramble shRNA的星形胶质细胞.结论:成功构建表达大鼠CX43 特异性发夹状shRNA的重组腺病毒载体,将为应用基因沉默技术研究CX43在神经系统疾病尤其是缺血性脑损伤中的作用提供依据.
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文献信息
篇名
大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定
来源期刊
中国康复
学科
医学
关键词
CX43
腺病毒载体
RNA干扰
基因治疗
缺血性脑损伤
年,卷(期)
2010,(6)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
411-415
页数
分类号
R49|R743
字数
3677字
语种
中文
DOI
10.3870/zgkf.2010.06.003
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
王伟
华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科
371
2310
22.0
32.0
2
朱舟
华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科
43
158
7.0
11.0
3
汪琦
华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科
5
7
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4
徐逸
华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科
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引证文献(0)
二级引证文献(1)
研究主题发展历程
节点文献
CX43
腺病毒载体
RNA干扰
基因治疗
缺血性脑损伤
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国康复
主办单位:
中国残疾人康复协会
华中科技大学同济医学院
出版周期:
月刊
ISSN:
1001-2001
CN:
42-1251/R
开本:
大16开
出版地:
武汉解放大道1095号同济医院
邮发代号:
38-137
创刊时间:
1986
语种:
chi
出版文献量(篇)
4930
总下载数(次)
7
总被引数(次)
37095
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