用反向斑点杂交方法检测猪常见致病菌

• 作者: 伍诚意 季海峰 宋勤叶 曹峰子 梁之昶 江洪 陈小玲
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 反向斑点杂交 rRNA基因 猪致病基因 反向PCR
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 401-405
• 分类号: Q78
• 字数: 4153字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.03.024

摘要

目的:建立检测猪常见致病菌的反向斑点杂交方法.方法:将23S rRNA基因芯片用的针对12种细菌的25～30 mer探针加长到30～38 mer,2对通用引物序列不变.用地高辛标记下游引物,以尼龙膜为载体制备膜芯片,检验探针/膜杂交的特异性和敏感性;另外设计1条大肠杆菌K88基因探针、一段带K88探针的报告基因和1对报告基因的反向PCR引物,在PCR体系中增加封口的K88报告基因和反向引物对,被检样品扩增后进行膜杂交.结果:修改的13条探针与参考目标菌株在膜上成特异性杂交,对52个参考菌株和野外分离株的检测准确率为92%;膜杂交的敏感性与玻片芯片接近,最小检出量为100 fg DNA;在尼龙膜上增加K88探针,与3重PCR产物杂交,可以检测到大肠杆菌K88毒力基因.结论:建立的反向斑点杂交方法简便快速,检测成本低,可用于仪器设备不足的实验室,同时可以加入检测如大肠杆菌K88等致病基因,提高基于保守基因的芯片的诊断能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	季海峰	北京市农林科学院畜牧兽医研究所	79	533	12.0	19.0
2	陈小玲	北京市农林科学院畜牧兽医研究所	43	441	11.0	19.0
3	宋勤叶	河北农业大学动物科技学院	35	250	9.0	14.0
4	江洪		5	20	3.0	4.0
5	曹峰子	河北农业大学动物科技学院	2	12	1.0	2.0
9	伍诚意		1	1	1.0	1.0
10	梁之昶		1	1	1.0	1.0