单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养人退变椎间盘髓核细胞的形态学观察

• 作者: 吴小涛 张明 王运涛 王锋 邵建树
• 来源期刊: 中国脊柱脊髓杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 椎间盘退行性变 髓核细胞 胶原酶 细胞培养 甲苯胺蓝 免疫细胞化学
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 300-304
• 页数: 5页
• 分类号: Q813.1
• 字数: 4342字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-406X.2010.04.10

摘要

目的:探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外培养扩增人退变椎间盘髓核细胞的可行性.方法:收集20例人退变椎间盘髓核,单纯Ⅱ型胶原酶消化分离出髓核细胞并连续培养传代,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖的表达,免疫细胞化学法行Ⅱ型胶原染色,观察髓核细胞的类软骨表型表达情况.结果:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可较好的分离培养人退变椎间盘髓核细胞,20例人退变椎间盘髓核,培养成功16例;原代髓核细胞平均7d贴壁,呈类圆形或多角形,P1代髓核细胞平均12h贴壁,呈大梭形或多角形,两代细胞融合95%所需时间分别为30d和7d,差异有统计学意义(P＜0.01);聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原主要表达于原代和P1代髓核细胞浆内,被甲苯胺蓝染成天蓝色,免疫细胞化学染色主要表现为黄褐色沉淀,两代间聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达无统计学差异(P＞0.05).结论:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可简化髓核细胞分离步骤,提高培养效率;传一代后髓核细胞增殖速率提高,但仍维持类软骨表型,表达聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王锋	东南大学附属南京市中大医院骨科	55	322	9.0	15.0
2	吴小涛	东南大学附属南京市中大医院骨科	243	1719	20.0	27.0
3	王运涛	东南大学附属南京市中大医院骨科	72	412	12.0	16.0
4	邵建树	东南大学附属南京市中大医院骨科	6	77	4.0	6.0
5	张明	东南大学附属南京市中大医院骨科	20	162	7.0	12.0