ELISA差减分析——一种简便实用的免疫逃逸变异HBsAg检测新方法

• 作者: 刘静华 张春燕 彭静 李佩珊 李方和 陈妍 黄永国
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙肝病毒 基因变异 HBsAg 免疫逃逸变异 ELISA
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 642-645,654
• 分类号: R392-33
• 字数: 5238字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.07.015

摘要

目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异 HBsAg检测的新方法.方法:以市售ELISA 试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析"方式确认免疫逃逸变异HBsAg阳性者;以中和实验及雅培化学发光试剂验证检测结果的特异性;并对部分免疫逃逸变异 HBsAg阳性者以PCR及直接测序做HBV DNA分析.结果:自10 231例受检者中筛选HBsAg ELISA检测信号灰区标本244例;复核检测显示G6 ELISA、市售ELISA两者对野生HBsAg检测敏感性分别为0.062 5 ng/ml,与0.125 ng/ml;检测阳性率分别为16.80%(G6 ELISA)及5.73%(市售ELISA ).ELISA差减分析确定免疫逃逸变异HBsAg阳性者27例,阳性率为11.07%.对部分免疫逃逸变异 HBsAg阳性血清做进一步考核,抗HBs中和强度为(84.07%±6.32%),中和率100%(13/13);雅培化学发光试剂复核阳性率为94.4%(17/18,阳性者中包括两份单项G6-ELISA检测最低阳性信号标本);HBV DNA阳性率36.9%(7/19),略低于同期HBsAg低信号阳性者(6/14,42.9%,P＜0.05);直接测序发现其中"a"区变异3例,分别为 P142L、T126A及M133T/K160T;S蛋白亲水区非"a"决定簇变异1例,变异类型为L109Q.结论:ELISA差减分析法能有效地用于部分免疫逃逸变异HBsAg的临床诊断,其诊断能力视所依托试剂免疫逃逸变异检测能力不同而有显著差别.