pFGC5941的改造及芸薹属透明种皮1基因(TT1)家族RNA干扰载体构建

• 作者: 冯瑜 柴友荣 江丽萍 申敏 马丽娟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 芸薹属 甘蓝型油菜 透明种皮1(TT1) RNAi 载体
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 研究资源
• 页码范围: 1189-1196
• 分类号: S8
• 字数: 6629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.06.024

摘要

pFGC5941是使用较多的植物RNA干扰载体,但其间隔区过长,间隔区与启动子间可用酶切位点偏少.本研究采用基于甘蓝型油菜(Brassica napus)PAP2基因第2内含子(BnPAP2I2)的新型间隔区取代了pFGC5941的原有PhChsA间隔区,并在新间隔区与启动子之间的多克隆位点处新增了一个AatⅡ切点,改进后的载体取名为pFGC5941M.克隆了芸薹属透明种皮1(TT1)基因家族RNA干扰片段BTT1Ⅰ,将其反义片段和正义片段采用Nco Ⅰ+AatⅡ和BamHⅠ+XbaⅠ分别插入到pFGC5941M的启动子与间隔区、间隔区与终止子之间,形成重组载体pFGrC5941M-BTT1Ⅰ(简称pBTT1 Ⅰ),复合PCR鉴定表明载体构建成功,转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404后获得工程菌株.pBTT1Ⅰ的构建有助于揭示芸薹属种皮发育和种皮色素积累的机理和探索黄籽性状分子育种.