犬和猫狂犬病病毒抗体SPA-ELISA检测方法的建立

• 作者: 曾妮 李刚 范晓娟
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒 N蛋白 原核表达 酶联免疫吸附试验 SPA 抗体
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 616-621
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文

摘要

采用RT-PCR方法扩增狂犬病病毒(RV)Flury LEP毒株N基因,将该片段克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,测序验证后将阳性重组质粒转化至宿主菌E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blot分析.结果显示,RV N蛋白以包涵体形式表达,大小约为70 ku,且该重组N蛋白具有良好的反应原性.用纯化的重组N蛋白作为诊断抗原建立了检测犬、猫RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原的最佳包被浓度为6 μg/mL,血清最佳稀释度为1:200,SPA-HRP的最佳稀释度为1:2 000.用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对30份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为96.67%.表明基于重组N蛋白的间接ELISA方法可用于检测犬、猫RV抗体水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李刚	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	111	742	14.0	23.0
2	范晓娟	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	8	55	4.0	7.0
3	曾妮	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	10	67	4.0	8.0