荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究

• 作者: 刘长明 危艳武 张朝霞 黄立平
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 变异毒株 荧光定量RT-PCR 体内分布规律
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 444-448
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计1对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了1种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量.在10~1～10~6拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为R~2=0.999 8.扩增效率为E=0.950,对质粒标准品最低检测限为12.8拷贝/μL,重复性检测的变异系数低于2.0%.用高致病性PRRSV变异毒株人工感染25日龄非免疫仔猪,对不同时间采集的血清进行了病毒核酸定量检测,结果表明病毒血症于攻毒后48 h被检测出,于7～10 d达到高峰,其病毒核酸载量能达到10~6拷贝/μL.试验猪临床表现为体温升高至40.5℃以上,持续7～11 d;出现嗜睡、打喷嚏、眼结膜炎、偶见一过性的耳尖发绀、皮肤苍白或有小疱疹、被毛粗糙、消瘦、便秘、后躯无力等临床症状.感染猪发生高热期与毒血症消长规律有一定相关性.对人工感染猪体内病毒分布检测结果表明,以多种脏器均有病毒存在,如扁桃体、淋巴结、心脏、肾脏中含量较高,肝、脾脏和肺次之,脑组织中也检测到病毒存在.试验表明,该方法可用于PRRSV变异毒株核酸定量检测,为该病毒致病性、致病机理、疫苗免疫及诊断等方面的研究提供了技术手段.