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pLenti6/V5-DEST-TAZ载体的构建及其对成骨前体细胞MC3T3-E1分化的影响
pLenti6/V5-DEST-TAZ载体的构建及其对成骨前体细胞MC3T3-E1分化的影响
作者:
史学涛
尹战海
张璐
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
TAZ转录因子
成骨细胞
慢病毒
成骨分化
摘要:
目的:构建人真核表达的TAZ慢病毒载体pLenti6/V5-DEST-TAZ,转染293FT 细胞获得重组慢病毒颗粒,探讨TAZ对成骨前体细胞MC3T3-E1 分化的调控作用.方法:将已经过测序验证的含有TAZ基因慢病毒入门质粒pENTR(tm)221-TAZ通过LR反应克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中.对重组质粒进行酶切鉴定,并在细胞中验证表达.将该重组载体和其他PackingMix 3 个质粒载体充分混合,用阳离子脂质体转染293FT 细胞,培养和待细胞完全裂解后收集富含TAZ基因的病毒颗粒上清液,取适量上清液感染MC3T3-E1细胞,采用杀稻瘟菌素Blastcidin 筛选,建立稳定过量表达 TAZ 蛋白的 MC3T3-E1/TAZ细胞系.用条件培养基诱导 MC3T3-E1和 MC3T3-E1/TAZ细胞系向成骨细胞定向分化,von Kossa 和茜素红染色观察MC3T3-E1和MC3T3-E1/TAZ细胞的成骨分化.结果:凝胶电泳和测序结果均证明TAZ重组慢病毒载体pLenti6/V5-DEST-TAZ构建正确,并能在细胞中正确表达.与辅助质粒共转包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染MC3T3-E1细胞.Von Kossa 染色和茜素红染色, MC3T3-E1/TAZ细胞系中生成的磷酸钙比MC3T3-E1细胞系中生成的磷酸钙多.结论:成功构建了人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-TAZ,并能在细胞中正确表达;成功包装了TAZ病毒,并获得过表达TAZ的MC3T3-E1细胞;过表达TAZ促进MC3T3-E1向成骨细胞分化.
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文献信息
篇名
pLenti6/V5-DEST-TAZ载体的构建及其对成骨前体细胞MC3T3-E1分化的影响
来源期刊
吉林大学学报(医学版)
学科
生物学
关键词
TAZ转录因子
成骨细胞
慢病毒
成骨分化
年,卷(期)
2010,(3)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
429-433,封2
页数
分类号
Q78
字数
语种
中文
DOI
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
尹战海
西安交通大学医学院第一附属医院骨科
37
322
11.0
17.0
2
史学涛
第四军医大学生物医学工程系医学电子工程教研室
102
801
15.0
22.0
3
张璐
第四军医大学生物医学工程系医学电子工程教研室
10
26
3.0
5.0
传播情况
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2000(1)
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2003(1)
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二级参考文献(0)
2004(2)
参考文献(2)
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2005(1)
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2006(2)
参考文献(2)
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2007(1)
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2010(0)
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引证文献(0)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
TAZ转录因子
成骨细胞
慢病毒
成骨分化
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
吉林大学学报(医学版)
主办单位:
吉林大学
出版周期:
双月刊
ISSN:
1671-587X
CN:
22-1342/R
开本:
大16开
出版地:
吉林省长春市新民大街828号
邮发代号:
12-23
创刊时间:
1959
语种:
chi
出版文献量(篇)
8631
总下载数(次)
12
总被引数(次)
34977
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