淋球菌porB和大肠杆菌ltB融合基因的构建、表达及其免疫活性

• 作者: 余敏君 刘清南 张愉快 戴志兵 朱翠明 李忠玉 王玉峰 胡四海 陆春雪 陈敏
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 淋病奈瑟菌 孔蛋白B 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 基因融合 原核表达 免疫活性
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 侵染和免疫
• 页码范围: 517-523
• 页数: 7页
• 分类号: R392
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建融合基因原核表达载体pET-30a/1tB-porB,并表达重组融合蛋白LTB- PorB,鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,分析重组融合蛋白的免疫活性,为研制抗淋病蛋白疫苗提供实验依据.[方法]构建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)与淋球菌外膜孔蛋白B(PorB)融合基因及LTB、PorB单基因pET-30a原核表达载体,在大肠杆菌BL21中表达重组蛋白;鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平.[结果]在大肠杆菌BL21中获得高效表达的重组蛋白;经鼻饲免疫小鼠后,重组融合蛋白LTB-PorB组生殖道黏膜产生的PorB特异性slgA水平随免疫时间呈上升趋势,第42天A_(450)值达0.66,明显高于对照组(P<0.01),效价高达1:1280;血清中产生的PorB特异性IgG第28天达最高,A_(450)值为0.60,明显高于LTB和蛋白溶解液(Solution Buffer)对照组(P<0.01),效价高达1:2560,但与PorB对照组血清IgG水平(A_(450):0.57)无明显差异(P>0.05).LTB-PorB组脾淋巴细胞刺激指数明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.05),但脾淋巴细胞诱生的IFN-γ水平与对照组无明显差异(P>0.05).[结论]重组融合蛋白LTB-PorB通过鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠后,能诱导产生高水平的体液免疫和一定水平的细胞免疫.首次证实黏膜佐剂LTB可辅佐PorB诱导小鼠产生高水平的生殖道粘膜免疫.