染料法实时荧光聚合酶链反应检测人外周血αβT淋巴细胞克隆的条件优化及初步应用

• 作者: 何剑琴 俞海英 李敏伟 杨介钻 高海女
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 反转录聚合酶链反应 受体,抗原,T细胞 基因扩增 肝炎,乙型,慢性
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 645-650
• 分类号: R3
• 字数: 4331字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2010.11.002

摘要

目的 探讨实时荧光PCR检测人外周血αβT淋巴细胞克隆性扩增的反应条件及在监测慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者外周血克隆特异性T淋巴细胞上的初步应用.方法 染料法(SYBR Green Ⅰ)实时荧光PCR对6例健康献血者外周血单个核细胞(PBMC)来源的T淋巴细胞受体β链可变区(TCRBV)基因进行扩增,分别就退火温度、引物浓度、循环数等进行比较研究.优化后PCR检测12例慢乙肝患者PBMC来源的TCRBV的24个基因家族,作PCR产物的熔解曲线峰形图,并分析T淋巴细胞克隆性扩增情况.结果 染料法实时荧光PCR检测 TCRBV基因家族的最佳退火温度为60.6℃,引物终浓度为0.5 μmol/L,循环数为40个,且熔解曲线分析起始温度80℃优于75℃.PCR产物熔解曲线峰形图上发现,慢乙肝患者某些TCRBV基因家族表现为单峰,测序结果表明其为单克隆PCR产物.结论 本研究优化了染料法实时荧光PCR检测TCRBV基因家族方法,熔解曲线峰形图可用于检测人外周血T淋巴细胞的克隆性扩增,并可能用于检测慢乙肝患者外周血克隆特异性T淋巴细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李敏伟	浙江大学医学院附属第一医院传染科传染病诊治国家重点实验室	31	322	13.0	17.0
2	高海女	浙江大学医学院附属第一医院传染科传染病诊治国家重点实验室	19	32	4.0	4.0
3	杨介钻	浙江大学医学院附属第一医院传染科传染病诊治国家重点实验室	16	57	5.0	7.0
4	俞海英	浙江大学医学院附属第一医院传染科传染病诊治国家重点实验室	9	16	2.0	4.0
5	何剑琴	浙江大学医学院附属第一医院传染科传染病诊治国家重点实验室	19	69	5.0	7.0