基于DNA杂交CD式微流控芯片筛查苯丙酮尿症方法的建立

• 作者: 刘大渔 周小棉 李春宇 江剑辉 王秋平 邹晓 陈斌 雷秀霞
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 苯丙酮尿症 苯丙氨酸羟化酶 微流体分析技术 核酸杂交
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 所属期刊栏目: 临床实验诊断研究
• 页码范围: 631-635
• 分类号: R4
• 字数: 3787字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2010.07.010

摘要

目的 建立一种基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片技术,用于PKU基因突变快速筛查.方法 设计并加工一种具有12个微通道的CD式微流控芯片,芯片采用PDMS-玻璃双层结构,分别含有微通道和水凝胶结合探针区.探针区包括R243Q、V245V和空白对照.将PAH外显子7扩增产物加入芯片的进样孔,在离心力的作用下进入杂交微通道区.芯片在离心机中交替旋转或暂停从而进行杂交反应.杂交后将芯片置于荧光显微镜下观察结果并分析荧光信号.评价该方法检测特异性、检测限及重复性.对30例疑似PKU孕妇DNA标本进行检测,并将检测结果与测序比较.结果 利用基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片只需1.5μl样品,杂交时间为15 min,杂交检测限为0.7 ng/μl.对于PKU患者组与健康对照组,芯片检测结果与测序结果一致.挑选不同批次的5张芯片及每张芯片内5个微通道重复检测同一V245V突变PKU患者DNA标本,结果均为阳性,说明重复性较好.对30例疑似PKU孕妇标本进行检测,筛查出4例携带V245V突变,1例携带R243Q突变.结论 建立了一种基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片检测PKU基因突变的方法,该方法简便、快速、高灵敏,可以用于PKU产前筛查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	江剑辉		17	151	6.0	12.0
2	周小棉	广州医学院附属广州市第一人民医院检验科	47	345	9.0	17.0
3	陈斌	广州医学院附属广州市第一人民医院检验科	11	33	4.0	5.0
4	王秋平	广州医学院附属广州市第一人民医院检验科	6	17	3.0	3.0
5	李春宇	中国科学院大连化学物理研究所	1	1	1.0	1.0
6	邹晓	广州医学院附属广州市第一人民医院妇产科	3	88	2.0	3.0
7	雷秀霞	广州医学院附属广州市第一人民医院检验科	20	89	5.0	8.0
8	刘大渔	广州医学院附属广州市第一人民医院检验科	16	50	4.0	6.0