高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2主要抗原区域的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 张博 徐志文 朱玲 林华 王印 王小玉 郭万柱 陈弟诗 陈扬
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征 NSP2 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 711-716
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4315字
• 语种: 中文

摘要

本研究以高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HPPRRSV)重组NSP2蛋白为包被抗原,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法.通过RT-PCR技术,从PRRSV SCMS08株中,成功扩增出NSP2的主要抗原区域.将其克隆到pET-32a(+),成功构建原核表达载体,并转化宿主菌(E.coli)Rosetta 2(DE3).以镍柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE检测证实重组蛋白获得了高效表达,Western blot检测表明所表达蛋白能够被抗组氨酸标签单克隆抗体和PRRSV阳性血清识别.以此蛋白包被酶标板,初步建立了PRRSV NSP2-ELISA诊断方法.优化的NSP2-ELISA的最佳抗原包被浓度为1.7 μg·mL-1,血清的最佳稀释度为1∶40.用该方法检测185份血清样品,与IDEXX公司ELISA试剂盒检测结果符合率为90.8%.建立的间接ELISA方法敏感性高、特异性强,可用于猪繁殖与呼吸综合征的常规诊断及流行病学调查.