豆豉纤溶酶的定向进化

• 作者: 崔堂兵 张少平 郭勇 陈亮
• 来源期刊: 华南理工大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 枯草芽孢杆菌 豆豉纤溶酶 易错PCR 定向进化 筛选
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 138-141,146
• 分类号: Q319
• 字数: 4486字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-565X.2010.09.026

摘要

为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序列分析表明突变酶mDFE3基因发生了6处碱基突变,其中4处突变发生氨基酸取代,2处为同义突变;通过swiss-model repository模拟突变酶mDFE3的结构,显示3个突变氨基酸位于回环结构上,1个位于α螺旋上;酶动力学测定结果表明突变酶mDFE3的Km值由0.58mmol/L降低至0.45mmol/L,突变酶mDFE3的催化效率( kcat)是野生型的2.57倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭勇	华南理工大学生物科学与工程学院	195	2299	24.0	36.0
2	崔堂兵	华南理工大学生物科学与工程学院	47	767	15.0	26.0
3	陈亮	华南理工大学生物科学与工程学院	43	242	10.0	13.0
4	张少平	华南理工大学生物科学与工程学院	3	12	2.0	3.0