空肠弯曲菌FlaA单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 刘秀梵 尹衍新 张弓 梅德霞 潘志明 焦新安 黄金林
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 鞭毛蛋白FlaA 空肠弯曲菌 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 1109-1114
• 分类号: R329
• 语种: 中文

摘要

[目的]原核表达空肠弯曲菌鞭毛蛋白FlaA,并制备其单克隆抗体.[方法]克隆目的基因并将其构建到pET30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,分别以变复性纯化后的rHis-FlaA、rGST-FIaA蛋白为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选.采用间接ELISA法测定细胞上清和单抗腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析单抗特异性.[结果]成功构建pET30a(+)-flaA和pGEX-6p-1-flaA重组原核表达质粒,并融合表达rHis-FlaA和rGST-FlaA蛋白,Western blot试验显示天然蛋白多抗血清能与体外表达的蛋白呈现特异性反应,表明表达蛋白具有免疫原性.筛选获得3株稳定分泌抗FlaA的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2D12、5E12、6A9,其Ig亚类分别为IgG2a、IgG1、IgG1,腹水效价分别为1:102400,1:102400和1:51200;Western blot试验显示,3株单抗均能与表达rHis-FlaA重组蛋白的细菌发生特异性反应;Dot-ELISA试验表明,3株单抗均能与不同来源的空肠弯曲菌分离株发生特异性反应.[结论]本研究制备的单克隆抗体有较高特异性,具有良好的应用价值.为进一步研究空肠弯曲菌鞭毛蛋白的生物学特性、致病机理,以及建立快速检测技术奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	焦新安	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	249	2602	25.0	38.0
2	潘志明	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	163	1328	20.0	28.0
3	刘秀梵	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	373	3732	28.0	39.0
4	黄金林	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	115	959	16.0	26.0
5	尹衍新	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	4	20	3.0	4.0
6	张弓	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	4	20	3.0	4.0
7	梅德霞	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	1	6	1.0	1.0