Pronase E酶解释放糖蛋白N-糖链的方法及荧光标记衍生物的LC-MS分析

• 作者: 张萍 徐莎 王仲孚 黄琳娟
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 化学
• 关键词: Pronase E 糖蛋白 9-氯甲酸芴甲酯 电喷雾质谱 荧光标记
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 1992-1998
• 分类号: O629.7
• 字数: 4643字
• 语种: 中文

摘要

建立了一种用非特异性酶链酶蛋白酶 E(Pronase E)从糖蛋白上释放N-糖链的方法. 以牛胰核糖核酸酶 B(Ribo B)和鸡白蛋白(Chicken Albumin)为材料,用Pronase E代替N-糖苷酶 F(PNGase F)释放N-糖链. 当蛋白酶质量与糖蛋白质量比为1∶1时,得到只带一个天冬氨酸(Asn)的闭环N-糖链,称其为糖氨酸(glycan-Asn),这样既为糖链引入了天然的-NH2活性基团,同时还保持了糖链原有的还原端闭环结构. 以9-氯甲酸芴甲酯(Fmoc-Cl)为衍生试剂对解离后的糖氨酸进行衍生,采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI/MS)对Fmoc-Cl糖氨酸衍生物进行分析,建立了糖蛋白的Pronase E酶解、微量糖氨酸的Fmoc-Cl衍生以及糖氨酸衍生物的HPLC-ESI/MS分析方法,该方法保持了N-糖链的天然结构,便于以-NH2为功能基团进一步进行荧光标记、分离制备以及糖链与蛋白质的相互作用研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张萍	西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室	60	286	8.0	15.0
3	徐莎	西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室	2	10	2.0	2.0
6	黄琳娟	西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室	20	270	9.0	16.0
7	王仲孚	西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室	21	202	8.0	14.0