原代人脐静脉内皮细胞分离培养方法的探讨及其鉴定

• 作者: 严凤英 于萍 关林波 周淑 彭冰
• 来源期刊: 华西医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 人脐静脉内皮细胞 分离 培养
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 727-729
• 页数: 3页
• 分类号: Q813.1
• 语种: 中文

摘要

目的 通过比较两种原代人脐静脉内皮细胞的分离培养方法并对细胞特异性抗原进行鉴定,探索提高原代内皮细胞体外培养存活率及纯化率的方法.方法 采用一次性无菌注射器向人脐静脉灌注消化液,消化液的浓度和消化时间分别0.25%(质量体积比)胰蛋白酶,10 min和0.1%(质量体积比)胶原酶Ⅱ,15 min.通过在倒置显微镜下观察细胞的形态特点和用免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定,比较两种消化方法的优劣.结果 0.1%胶原酶Ⅱ,15 min的消化方法较0.25%胰蛋白酶,10 min对原代人脐静脉内皮细胞有更好的分离效果,活细胞数量多且细胞纯度较高.免疫荧光染色结果表明细胞内有Ⅷ因子相关抗原表达.结论 胶原酶Ⅱ可以有效分离脐静脉内皮细胞,最佳消化条件是0.1%胶原酶Ⅱ,37℃,15 min.