伪狂犬病病毒实时荧光PCR的建立和应用

• 作者: 何云蔚 卢体康 吕建强 杨俊兴 秦智锋 花群义 阮周曦 陶虹
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病病毒 实时荧光PCR 检测
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 21-25
• 分类号: S852.659.1|S854.43
• 字数: 3499字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2010.03.005

摘要

伪狂犬病是世界范围内严重影响养猪业发展的重要动物疫病,快速检测是有效防控该病的重要措施之一.为了建立该病的快速分子生物学检测方法,根据GenBank中登录的伪狂犬病病毒gD基因序列,选择高度保守区域设计引物和TaqMan 荧光探针,通过对实时荧光PCR反应条件进行优化,建立了用于检测伪狂犬病病毒的实时荧光PCR方法.特异性试验结果表明,该检测方法只能检测到目的病毒,表明其具有良好的特异性.灵敏性试验发现,其最低检测限可达1.42 pg/μL的总DNA,与PCR方法的灵敏度对比试验表明,其敏感度比PCR至少高10倍.对同一样品进行重复性检测,在组内及组间检测的荧光扩增曲线基本重叠,证实其重复性好.对180份临床样品进行伪狂犬病病毒核酸检测,结果发现有52份阳性样品.结果表明,所建立的实时荧光PCR方法可对伪狂犬病病毒进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高、重复性好的优点,是开展伪狂犬病的临床检测和疫情监测工作的有力工具.