衔接蛋白2基因siRNA表达载体的构建及鉴定

• 作者: 刘全 刘宁 周蔷 张勇 李洪岩
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干涉 衔接蛋白2 短链干涉RNA
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 331-335
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建针对衔接蛋白2的μ2亚单位 (AP2-μ2) 的短链干涉RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对AP2-μ2基因的干涉作用.方法:设计AP2-μ2靶向的发夹状siRNA,据此设计合成3条互补的寡核苷酸链,退火后分别连接到 pSilencer 3.1 neo H1 载体,转化扩增后进行序列测定.待转染细胞分为对照组、Scramble plasmid、AP2 plasmid-1,AP2 plasmid-2 和 AP2 plasmid-3组.用脂质体转染法将3组 siRNA 重组质粒与阴性对照质粒 (Scramble plasmid) 转染大鼠心肌细胞株H9C2,通过RT-PCR法检测 AP2-μ2基因表达水平的变化.结果:合成的6条寡核苷酸单链凝胶电泳显示多个电泳条带,分别退火后,产物经凝胶电泳显示形成单一条带.双链DNA模板与载体质粒连接后,用BamH I和HindⅢ双酶切,凝胶电泳可见4 300和66 bp的酶切片段.DNA测序连接的核酸序列与设计序列一致,表明AP2-μ2基因的3条 siRNA 载体构建成功.RT-PCR检测,在AP2 plasmid-1组,转染的H9C2细胞中AP2-μ2的基因表达水平较阴性对照组降低约96%.结论:成功地构建了针对AP2-μ2基因的3条siRNA载体,其中AP2 plasmid-1 转染细胞后可显著抑制AP2-μ2 基因表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张勇	吉林大学基础医学院病理生理学教研室	79	378	10.0	15.0
2	刘全	吉林大学第一医院心血管内科	96	482	11.0	16.0
3	周蔷	吉林大学第一医院心血管内科	2	4	1.0	2.0
4	刘宁	吉林大学基础医学院病理生理学教研室	60	145	6.0	7.0
5	李洪岩	吉林大学基础医学院病理生理学教研室	42	213	7.0	13.0