纳米金辅助不对称PCR扩增幽门螺杆菌23S rRNA基因的优化和建立

• 作者: 周洁 周玉贵 宣世海 崔亚林 徐康 李明兰 王惠民 王琴
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 关键词 螺杆菌,幽门 基因 芯片 克隆 纳米金 优化
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 检验与临床
• 页码范围: 122-124
• 页数: 3页
• 分类号: R9
• 字数: 3660字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2010.01.059

摘要

目的:建立纳米金辅助不对称PCR方法扩增幽门螺杆菌23S rRNA基因,为建立基因芯片法检测幽门螺杆菌耐药基因提供试验平台.方法:将幽门螺杆菌23S rRNA基因转化至感受态大肠杆菌JM109,小量抽提阳性构建质粒DNA,以质粒DNA为模板,设计引物对23S rRNA基因进行不对称PCR扩增.对PCR条件中引物浓度及浓度比例、纳米金浓度等进行优化.结果:限制性引物与非限制性引物浓度比例为1 ∶ 60,限制性引物与非限制性引物浓度分别为0.04 pmol/L、2.4 pmol/L时可获得理想的单链和双链DNA,纳米金浓度为0.8 nmol/L时非特异性产物最少,PCR的扩增效率最高.结论:通过对PCR扩增条件的优化,确立了扩增幽门螺杆菌23S rRNA基因纳米金辅助不对称PCR方法的最佳条件,为建立基因芯片法检测幽门螺杆菌耐药基因奠定基础.