1种改良的高效单特异性兔多克隆抗体的制备方法

• 作者: 易维京 李淑慧 胡川闽 钟丹
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白 快速免疫法 抗体 抗原
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 315-316,319
• 分类号: R446.61
• 字数: 2707字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4130.2010.04.002

摘要

目的 建立1种改良的高效单特异性兔多克隆抗体的制备方法.方法 用RT-PCR方法获得bax保守N端1～123位氨基酸基因片段,并将其插入pET42a原核表达载体,诱导表达的Bax融合蛋白组合应用GST、His亲和层析技术获得免疫原(pET42a/Bax融合蛋白),HPLC鉴定纯度达95%.利用改良快速免疫法获得人Bax兔多克隆抗体,并经蛋白A柱亲和层析技术,抗原亲和纯化技术获得高效价高特异性的抗体.间接ELISA检测抗体滴度、Western blot和免疫组化试验检测抗体特异性,并与商业化抗体进行对比.结果 通过快速免疫法得到人Bax兔多克隆抗体,经过Protein A柱纯化,再经抗原亲和纯化后,间接ELISA证明,抗体效价均达1∶51 200;Western blot显示,只有经过抗原亲和纯化后的抗体特异性高,无其他杂带;免疫组化证明,在原发性肝癌组织中,人Bax兔多克隆抗体能特异地和内源性Bax结合,其高效高特异性已达国外Santa Cruse公司 Bax商业化抗体水平.结论 快速免疫法与抗原亲和纯化相结合,获得人Bax高效单特异性兔多克隆抗体,建立了1种改良的高效单特异性兔多克隆抗体的制备方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡川闽	第三军医大学临床生化教研室	56	209	7.0	11.0
2	易维京	第三军医大学临床生化教研室	19	81	6.0	8.0
3	李淑慧	第三军医大学临床生化教研室	42	315	9.0	16.0