HCMV pp65 DNA疫苗的纯化与检定

• 作者: 汤仁树 王兴满 王明丽 赵俊 陈敬贤
• 来源期刊: 安徽医学
• 学科: 医学
• 关键词: HCMV pp65 DNA疫苗 质粒 纯化
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 201-204
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3626字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-0399.2010.03.003

摘要

目的 研究HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)的纯化工艺,并建立质控标准.方法 对工程菌(DH5α/peDNA3.1-pp65)的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析(依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析)对质粒进行纯化,检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定.结果 质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,经阴离子柱层析有效去除内毒素,质粒得率为0.8～0.95 mg/g菌,质粒总回收率达72.7%.三批终产品全面质量检定均符合规定.结论 建立了稳定的HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定了重要基础.