梨NAC结构域蛋白基因克隆与mRNA嫁接传递性研究

• 作者: 宫磊 张文娜 徐海燕 李天忠 杨玉艳 胡建芳
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 梨 NACP基因 mRNA 嫁接 分子传递
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 2307-2314
• 分类号: S6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.11.014

摘要

[目的]克隆梨 NAC 结构域蛋白基因 NACP,验证其mRNA是否可以通过韧皮部进行嫁接传递.[方法]利用同源克隆的方法,分别克隆‘鸭梨'(Pyrus bretschneider,Yali)和杜梨(Pyrus betulaefolia Bunge)的NACP基因,利用生物信息学方法进行序列分析.以‘鸭梨'为接穗,杜梨为砧木进行微嫁接.从接穗茎尖、叶片、茎段韧皮部,嫁接口及砧木韧皮部、木质部组织中提取RNA,进行RT-PCR扩增.用特异的限制性内切酶 ScrF I对其扩增产物进行酶切鉴定.利用原位杂交技术,检测NACP基因在植物体内的表达部位.[结果]获得‘鸭梨'和杜梨NACP基因全长序列,长度均为1377 bp,编码350个氨基酸,包含两个内含子,大小分别为111、96 bp,分别命名为YL-NACP和DL-NACP.酶切鉴定结果表明,在接穗‘鸭梨'茎尖、叶片、茎段韧皮部中都有砧木DL-NACP基因的mRNA表达,同时砧木杜梨韧皮部中也有接穗YL-NACP基因的mRNA表达,而木质部中则没有发现该基因表达.通过原位杂交进一步证明,NACP基因只定位于韧皮部.[结论]成功地从‘鸭梨'和杜梨中克隆了全长的NAC结构域蛋白基因NACP,并进一步证明了梨内源性的NACP基因mRNA可以通过韧皮部进行传递,该结果为进一步研究果树砧木与接穗的互作机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡建芳	中国农业大学农学与生物技术学院果树细胞与分子育种实验室	39	323	11.0	15.0
2	张文娜	中国农业大学农学与生物技术学院果树细胞与分子育种实验室	5	71	5.0	5.0
3	徐海燕	中国农业大学农学与生物技术学院果树细胞与分子育种实验室	2	11	1.0	2.0
4	杨玉艳	中国农业大学农学与生物技术学院果树细胞与分子育种实验室	2	21	2.0	2.0
5	宫磊	中国农业大学农学与生物技术学院果树细胞与分子育种实验室	1	11	1.0	1.0